INSTRUCTIONS MANUAL CODE 80158.02 REV 0 02/10/09 (It can be modified without notice) Page: 19
J.P. SELECTA s.a. Ctra. NII Km 585.1 Abrera 08630 (Barcelona) España Tel (34) 93 770 08 77 Fax (34) 93 770 23 62
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1. Principe:
La méthode consiste à minéraliser
l’échantillon avec l’acide sulfurique
concentré et alcaliniser avec
l’hydroxyde de sodium.
L’ammoniaque libéré est éliminé par
distillation et recueilli sur de l’acide
borique. La valoration postérieure à
l’acide chlorhydrique permet le
calcul de la quantité initialement
présente de protéine dans
l’échantillon.
2. Réactifs nécessaires :
• Ácide sulfurique 96% (d=1.84).
• NaOH, solution 35% (p/v).
• Indicateur mixte, spécial pour
titrations d’ammoniaque.
• Catalyseur Kjeldahl
• Acide borique à 4% (p/v).
• HCl 0.25N.
• Eau distillée.
• Pierre ponce en grains.
Note: Il est très important que tous
les réactifs soient totalement
exempts d’azote.
3. Matériel nécessaire :
• Balance de résolution 0.1 mg.
• Unité de digestion (Bloc-Digest).
• Collecteur / Extracteur de fumées.
• Distillateur Pro-Nitro I ou II
• Burette pour titration.
4. Digestion :
Peser de l’ordre de 1 gramme
d’échantillon parfaitement moulu et
homogénéisé dans un papier
exempt d’azote et l’introduire dans un
tube à digestion.
Ajouter au tube avec l’échantillon 10
g de catalyseur Kjeldahl, 25 ml
d’acide sulfurique à 96% (d=1.84), et
quelques grains de pierre ponce
traitée.
Placer les tubes de digestion avec
l’échantillon dans le Bloc-digest
avec le collecteur de fumées en
fonctionnement.
Réaliser la digestion à une
température entre 350 et 420ºC et
un temps qui peut varier entre 1 et
2 heures.
A la fin, le liquide obtenu est d’une
couleur verte ou bleue transparente
dépendant du catalyser utilisé.
Laisser refroidir l’échantillon à la
température ambiante.
Eviter la précipitation en agitant de
temps à autre.
Titrer lentement 50 ml d’eau distillée
dans chacun des tubes
échantillons. (Prendre des
précautions avec la violence de
la réaction).
Laisser refroidir les échantillons à
la température ambiante.
S’il se produit une précipitation,
agiter ou réchauffer légèrement.
5. Distillation
Doser 50 ml d’acide Borique dans
un Erlenmeyer avec quelques
gouttes d’indicateur mixte. Placer
l’Erlenmeyer sur la rallonge du
réfrigérant en prenant la précaution
qu’il reste submergé dans l’acide
Borique.
Une fois mis en place le tube
échantillon et l’Erlenmeyer avec
l’acide Borique, verser 50ml de
NaOH et commencer la distillation.
La distillation doit être prolongée un
temps suffisant pour que se
distillent un minimum de 150 ml,
approximativement de 5 à 10
minutes.
6. Essai en blanc :
Après la distillation d’un échantillon,
Savoir :
P = Poids en g de l’échantillon.
V
1
= Volume de HCl consommé
dans la titration (ml)
N = Normalité del HCl
V
0
= Volume de HCl consommé
dans la titration en blanc. (ml)
F = Facteur de conversion pour
passer du titre en azote au titre en
protéines. Pour la protéine brute on
est accoutumé à utiliser une valeur
de 6.25. Pour une exactitude plus
grande, en distinguant la nature de
la protéine selon la nature de
l’échantillon, d’autres facteurs de
conversions peuvent être utilisés.
KJ-02 DETERMINATION DE LA PROTEINE BRUTE PAR LA METHODE DE KJELDAHL.
(Méthode directe).
1.4 x (V
1
-V
0
) x N
% Azote =
P
% Protéine = % Azote x F
CET ESSAI DEMANDE LA MANIPULATION DE SUBSTANCES DANGEREUSES
MANIPULATION OF CORROSIVE PRODUCTS IS REQUIRED
RÉALISER UN ESSAI EN BLANC
EN APPLIQUANT LA METHODE
DÉCRITE, MAIS EN UTILISANT
5ML D’EAU DISTILLÉE.
7. Titration :
Titrer avec l’acide chlorhydrique
0.25N le distillat obtenu,
jusqu’à ce que la solution vire
du vert au violet.
Calculer la quantité d’azote
détectée.
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