Sélection de la phase mobile et températures de
fonctionnement
La phase stationnaire greffée est non polaire par nature et la plus efficace
avec des phases mobiles polaires, telles que les mélanges méthanol/eau
ou acétonitrile/eau. Augmenter la quantité du composant organique réduit
le temps de rétention de l’échantillon.
Une utilisation de la température maximale pour des périodes prolongées
réduira la durée de vie de la colonne.
Utiliser des éluants 100% aqueux avec des colonnes PLRP-S réduira
significativement la durée de vie de la colonne et pourra entraîner une
détérioration rapide de la largeur et de la symétrie des pics.
Gradients de base recommandés
Les séparations de molécules biologiques utilisent généralement des
conditions de gradient, augmenter la quantité du composant organique
permet d’obtenir une élution de la colonne. Les séparations de peptides,
de polypeptides et de protéines, sont le plus souvent effectuées à l’aide
d’éluants acides, contenant de l’acide trifluoroacétique (TFA) ou de l’acide
formique (FA), utilisés comme modificateurs pour le contrôle du pH et/ou
comme additifs d’appariement d’ions afin d’obtenir le temps de rétention
et la sélectivité souhaités. Les solvants organiques, tels que l’acétonitrile,
le méthanol et l’éthanol, sont utilisés pour l’élution, l’acétonitrile étant le
plus fréquemment utilisé.
Des informations supplémentaires sur les séparations de peptides peuvent être
consultées au chapitre11, pages497-508, du livre «Introduction to Modern
LiquidChromotography», deuxième édition. L. R. Snyder et J. J. Kirkland,
(JohnWiley & Sons, 1979).
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