Escolha de fase móvel e temperaturas operacionais
A fase estacionária ligada é não polar por natureza e é melhor usada com
fases móveis polares, como misturas de metanol/água ou acetonitrila/
água Aumentar a quantidade de componente orgânico reduz o tempo
de retenção da amostra.
A vida útil da coluna será reduzida se a temperatura máxima for usada
em períodos prolongados.
A utilização de eluentes 100% aquosos com colunas PLRP-S reduzirá
consideravelmente a vida útil da coluna e poderá provocar uma rápida
deterioração da largura e da simetria do pico.
Gradientes iniciais recomendados
A separação de moléculas biológicas geralmente emprega condições
de gradiente, aumentando a quantidade do componente orgânico
para obter a eluição da coluna. As separações de peptídeos,
polipeptídios e proteínas são realizadas mais frequentemente com
a utilização de eluentes com ácido trifluoroacético (TFS) ou ácido
fórmico (FA), usados como modificadores para o controle de pH
e/ou como aditivos de pareamento iônico para obter a retenção
e a seletividade desejadas. Os componentes orgânicos — como
a acetonitrila, o metanol e o etanol — são usados para a eluição
(a acetonitrila é o componente usado com mais frequência).
Mais informações sobre separações de peptídeos podem ser encontradas no
capítulo 11, páginas 497-508, de Introduction to Modern Liquid Chromotography,
segunda edição. L.R. Snyder e J. J. Kirkland, (John Wiley & Sons, 1979).
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