6. Remove the tube from the reading chamber.
7. Adjust the sample suspension with more organisms if the readout is lower than expected.
Vortex the sample and reread.
Note: Refer to the BD Phoenix System User’s Manual for the proper sample preparation for the
BD Phoenix System if the reading exceeds the expected McFarland range or refer to the
BBL Crystal system insert if the reading exceeds the expected McFarland range.
8. Repeat step 7 until the desired McFarland density is achieved.
9. When testing is complete, press the power button to turn the instrument OFF.
RESULTS
The PhoenixSpec instrument displays the measurement in McFarland units. These units represent
the optical density of the suspension and may be used to estimate the CFU/mL of the suspension
tested.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
1. The PhoenixSpec instrument must be calibrated with the PhoenixSpec Calibrators.
2. The PhoenixSpec Calibrators are to be used only for calibration of the PhoenixSpec
Nephelometer and not as a visual, manual approximation to a barium sulfate McFarland
standard.
3. Do not use the PhoenixSpec Nephelometer for measurements outside the range of 0.1 – 4.5
McFarland units.
4. Volumes below 2.0 mL must not be measured in the instrument.
5. BD “L” tubes - 16 mm diameter x 75 mm - must be used for samples.
6. Do not operate the instrument in direct sunlight.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
To determine the accuracy of the PhoenixSpec Nephelometer, colony counts were performed on
suspensions of E. coli ATCC 25922 prepared in saline. Each test dilution was performed in
replicates of six and the average of the plate counts is given in Table 1.
Table 1
McFarland Expected Adjusted* % CV
CFU/mL x 10
8
CFU/mL x 10
8
0.25 0.75 0.9 14.1
0.5 1.5 1.7 13.2
1 3.0 3.2 7.4
2 6.0 6.1 4.2
3 9.0 9.3 3.2
4 12.0 12.6 2.7
*Because of difficulty in achieving the exact target McFarland density, these
results were obtained by using the PhoenixSpec readings and adjusting the
observed CFU/mL as if each dilution had been the target McFarland.
WARRANTY
The PhoenixSpec Nephelometer is warranted to be free from defects for one year from date of
purchase.
MAINTENANCE
The general maintenance of the PhoenixSpec Instrument includes:
1. Wipe the exterior with a lint-free towel dampened with a mild, anti-bacterial solution.
2. Replace the batteries as needed.
TROUBLESHOOTING
Error messages
E-2 Two calibrators that were read were too close together in value (i.e., the same
calibrator was read twice during the calibration procedure).
E-3 Low light error – check for obstructed light path.
E-4 Memory failure. Press the on/off key and if the error reappears, contact service.
E-5 A/D overrange. Check for obstructed light path.
E-6 A/D underrange. Check for obstructed light path.
E-7 Light leak. Ensure the tube is capped with a black cap. Press the tube down into the
well to ensure it is fully inserted.
E-8 Bad lamp or bad lamp circuit. Contact BD Technical Services.
Cal? Do not use nephelometer. Contact BD Technical Services.
Low Replace all four AA alkaline batteries when the icon is flashing at the lower
Battery left corner on the display.
Note: If errors E-4, E-5, or E-6 appear consistently, an internal hardware problem is indicated and
BD Diagnostics Product Support should be contacted.
AVAILABILITY
Cat. No. Description
440910 BD PhoenixSpec™ Nephelometer
440911 BD PhoenixSpec™ Calibrator Kit (contains 0.25, 0.5, 1.0 and 4.0 calibrators)
441951 BD PhoenixSpec™ AP Calibrator Kit (contains 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 and 4.0 calibrators)
440986 BD PhoenixSpec™ 120V AC Adapter
440984 BD PhoenixSpec™ 240V AC Adapter
REFERENCES
1. McFarland, J. 1907. The nephelometer: an instrument for estimating the number of bacteria
in suspensions used for calculating the opsonic index for vaccines. JAMA 49:1176-1178.
2. Roessler, W.G., and C.R. Brewer, 1967. Permanent turbidity standards. Appl. Microbiol.
15:1114-1121.
3. Pugh, T.L., and W. Heller, 1957. Density of polystyrene and polyvinyl toluene latex particles.
J. Colloid Sci., 12:173-180.
4. Mallette, M.F. 1969. XV. Evaluation of growth by physical and chemical means, p. 521-566. In J.R.
Norris and D.W. Ribbons (ed.), Methods in microbiology, vol 1. Academic Press Inc., New York.
0
PhoenixSpec Nephelometer
Guide d’utilisation
Français
APPLICATION
Le néphélémètre BD PhoenixSpec est un instrument portable servant à mesurer la turbidité des
suspensions microbiennes équivalentes aux standards McFarland 0,10 – 4,50. L’instrument peut
être utilisé pour mesurer la densité d’un inoculum pour les systèmes BBL Crystal et BD Phoenix.
L’instrument fonctionne sur piles mais peut aussi être utilisé avec un adaptateur de courant
alternatif.
RESUME ET EXPLICATION
La comparaison visuelle des suspensions microbiennes à des standards de turbidité est une
méthode reconnue d’estimation des densités d’organismes. L’échelle de McFarland est la norme
la plus largement acceptée.
1
Un standard McFarland est préparé par l’addition de chlorure de
baryum à une solution aqueuse d’acide sulfurique. La densité du précipité de sulfate de baryum
ainsi formé peut servir à évaluer approximativement le nombre de colonies d’une suspension
préparée ; par exemple, McFarland 1 équivaut à environ 3,0 x 10
8
unités formant colonies
(UFC)/mL de E. coli, ATCC 25922. D’autres standards ont été utilisés pour les mesures de densité,
y compris le dioxyde de titane
2
et les suspensions de particules de latex.
3
Le néphélémètre
PhoenixSpec utilise des suspensions de particules de latex comme normes d'étalonnage ne
nécessitant pas d'agitation avant utilisation.
La mesure de la turbidité par l’instrument est fondée sur la capacité des particules en suspension
à disperser la lumière. Cette mesure de la diffusion lumineuse est appelée néphélométrie.
4
Afin
d’obtenir une mesure juste de la densité, il faut utiliser une méthode d’étalonnage fiable.
PRINCIPES DE LA METHODE
Le néphélémètre PhoenixSpec est un instrument à l’état solide qui utilise une lampe à filament
de tungstène comme source lumineuse, un détecteur à 90 ° pour évaluer la lumière diffusée et
un détecteur de la lumière transmise. Le microprocesseur de l’instrument calcule le rapport des
signaux reçus par le détecteur à 90 ° et le détecteur de la lumière transmise. La technique
quotientométrique compense pour la couleur et/ou les matériaux absorbant la lumière et pour
les fluctuations de l’intensité lumineuse de la lampe.
Avant toute prise de mesure, l’instrument PhoenixSpec est étalonné au moyen de la trousse
d’étalonnage PhoenixSpec ou PhoenixSpec AP. Afin de déterminer le standard McFarland équivalent
à la suspension microbienne, on place un tube dans la chambre de lecture et on appuie sur le bouton
test. Les résultats sont affichés sur l’écran à cristaux liquides (LCD) en unités McFarland. Les étalons
0,25 et 0,5 dans la trousse d'étalonnage PhoenixSpec sont lus quotidiennement comme des
échantillons afin d'assurer un fonctionnement correct. Les étalons 0,25, 0,5 et 2,0 dans la trousse
d'étalonnage PhoenixSpec AP sont lus quotidiennement comme des échantillons afin d'assurer un
fonctionnement correct.
SPECIFICATIONS
Plage................................McFarland 0,10 – 4,50
Précision ..........................McFarland 0,5 ± 0,08
McFarland 2,0 ± 0,1
Fidélité ............................McFarland 0,5 ± 0,04
McFarland 2,0 ± 0,1
Secteur de courant
alternatif ........................120 VAC ± 10%, 60 Hz
230 VAC ± 10%, 50 Hz
Piles..................................Quatre cellules pour piles
alcalines de taille AA
Vie de service des
piles,-nbre de tests, ........2300 tests
Conditions ambiantes
de fonctionnement ........20 °C à 30 °C
0 à 90% HR à 30 °C;
0 à 80% HR à 40 °C;
0 à 70% HR à 50 °C
Plage de température
de conservation
Néphélémètre : ..............-40 °C à 60 °C
Etalons :..............................5 °C à 60 °C
Taille du tube pour
l’échantillon ....................Tube BD « L », diamètre
16 mm, hauteur 75 mm,
Durée de vie
de la lampe ....................~ 400.000 lectures
2
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