3
(Suomenkielinen)
FI
1. Käytä sopivaa steriiliä laimenninta: Buttereldin fosfaattipuskuri
5
, 0,1-prosenttinen peptonivesi
5
, peptonisuola-
laimennin
6
, puskuroitu peptonivesi
6
, 0,125 prosentin vahvuinen Ringerin liuos
6
, dikaliumhydrogeenifosfaatti
6
,
suolaliuos (0,85–0,90 %), bisulititon letheen-liemi tai tislattu vesi.
Katso erityisvaatimukset kohdasta .
Jos sitraattipuskuri on indikoitu vakiomenettelyssä, korvaa se jollakin
edellä luetelluista puskureista lämmitettynä 40–45°C:n (104–113°F) lämpötilaan.
2. Sekoita tai homogenoi näyte.
3. Mikro-organismien optimaalinen kasvu ja palautuminen voidaan saavuttaa säätämällä näytteen pH-arvoksi
6,5–7,5. Jos näyte on hapan, säädä pH-arvoa 1N NaOH -liuoksella. Jos näyte on emäksinen, säädä pH-arvoa 1N HCl
-liuoksella.
1. Aseta 3M Petrilm SEC kasvatusalusta tasaiselle pinnalle vaakatasoon.
2. Nosta päällyskalvo ja annostele 1ml näytesuspensiota pohjakalvon keskelle pitäen pipettiä kohtisuorassa
inokulointialueeseen nähden.
3. Estä ilmakuplien syntyminen kiertämällä päälikalvo näytteen päälle.
4. Aseta 3M™ Petrilm™ levitin litteä puoli alaspäin keskelle 3M Petrilm SEC kasvatusalustaa. Paina kevyesti 3M
Petrilm levittimen keskikohtaa, jotta näyte jakautuu tasaisesti. Levitä inokulaattia 3M Petrilm SEC kasvatusalustan
koko kasvualueelle ennen kuin geeli jähmettyy. Älä vedä 3M Petrilm levitintä kalvoa pitkin.
5. Poista 3M Petrilm levitin ja jätä 3M Petrilm SEC kasvatusalusta rauhaan vähintään 1 minuutin ajaksi, jotta
geeliytyminen ehtii tapahtua.
Inkuboi 3M Petrilm SEC kasvatusalustat vaakasuorassa asennossa kirkas puoli ylöspäin enintään 20 alustan
pinoissa. Inkuboi 3M Petrilm SEC kasvatusalustoja 24 tuntia ± 2 tuntia lämpötilassa 42 °C ± 1 °C. Paikallisista
referenssimenetelmistä riippuen on mahdollista käyttää useita inkubointiaikoja ja -lämpötiloja, joista joitakin luetellaan
jäljempänä kohdassa .
Tulkinta
1. 3M Petrilm SEC kasvatusalustat voidaan laskea tavallisella pesäkelaskurilla tai muulla valaistulla suurennuslasilla.
Älä laske vaahdon pinnalla olevia pesäkkeitä, koska elatusaineen selektiivinen vaikutus ei kohdistu niihin. Älä laske
mahdollisia ihmiskäden aikaansaamia kuplia. E. coli muodostaa tummanvihreitä tai vaaleanvihreitä pesäkkeitä.
Pesäkkeiden yhteydessä voi olla kaasukuplia. Laske kaikki vihreät ja sinivihreät pesäkkeet E. coli -pesäkkeiksi
riippumatta siitä, onko niissä kaasukuplia vai ei.
W VAROITUS
E. coliE. coli O157
E. colista
E. coliksi
2. Pyöreä kasvualue on kooltaan noin 20 cm
2
. 3M Petrilm SEC kasvatusalustoista, joissa on yli 150 pesäkettä,
voidaan arvioida pesäkeluku laskemalla kahden tai useamman edustavan neliön pesäkkeiden määrä ja määrittämällä
pesäkkeiden keskimääräinen lukumäärä neliötä kohti. Määritä 3M Petrilm SEC -kasvatusalustan arvioitu määrä
kertomalla keskiarvo luvulla 20.
3. Kun pesäkkeitä on paljon, 3M Petrilm SEC kasvatusalustan koko kasvualue muuttuu harmaaksi tai siniseksi ja
siihen liittyy jompikumpi tai molemmat seuraavista ominaisuuksista: paljon pieniä, epäselviä pesäkkeitä ja/tai paljon
kaasukuplia. Tässä tapauksessa tulos on liian suuri laskettavaksi (TNTC). Mikäli tarvitset tarkan pesäkeluvun, toista
määritys käyttämällä suurempaa laimennosta.
4. Tarvittaessa pesäkkeet voidaan eristää myöhempää tunnistusta varten. Nosta päällyskalvo asianmukaista
testaustekniikkaa käyttäen ja poimi pesäke geelistä. Testaa vakiomenetelmillä.
5. Jos 3M Petrilm SEC kasvatusalustoja ei ole mahdollista laskea 1 tunnin sisällä niiden ottamisesta inkubaattorista,
ne voidaan säilöä myöhempää laskentaa varten jäädyttämällä ne suljetussa astiassa korkeintaan –15 °C:n (5 °F)
lämpötilassa enintään viikoksi.
To Next Page
Loading...
