Selezione della fase mobile e temperature operative
La fase stazionaria legata è per sua natura “non polare” ed è utilizzata al
meglio con fasi mobili polari, come miscele metanolo/acqua o acetonitrile/
acqua. Aumentare la quantità di componente organico riduce il tempo di
ritenzione del campione.
In caso di utilizzo a temperature massime per periodi prolungati, la durata
della colonna sarà ridotta.
Impiegando eluenti acquosi al 100% con colonne PLRP-S, la durata
operativa della colonna sarà drasticamente ridotta, il che può causare un
rapido degrado dell’ampiezza e della simmetria del picco.
Gradienti di avvio raccomandati
Per la separazione di molecole biologiche sono generalmente usate
condizioni di gradiente: aumentare la quantità di componente organico
per ottenere eluizione dalla colonna. Le separazioni di peptidi, polipeptidi
e proteine sono quelle più comunemente eseguite utilizzando eluenti
acidi con acido trifluoroacetico (TFA) o acido formico (FA), impiegati
come modificatori per il controllo del pH e/o come additivo in coppia
ionica per ottenere la ritenzione e la selettività desiderate. Per l’eluizione
sono impiegati composti organici, come acetonitrile, metanolo e etanolo.
L’acetonitrile è il solvente di uso più comune.
Ulteriori informazioni sulle separazioni dei peptidi si possono trovare al capitolo 11,
pagine 497-508, del libro Introduction to Modern Liquid Chromatography, Second
Edition. L.R. Snyder e J. J. Kirkland, (John Wiley & Sons, 1979).
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